使用Dextramer®改善实验
发布时间: 2020-10-27 10:47点击次数:

用葡聚糖成功染色取决于适当的实验设计。常规染色程序适用于大多数实验。但是,取决于所显示的MHC-肽复合物,不同的Dextramer试剂可能具有不同的染色特性。

请在此处找到各种技巧和窍门来优化Dextramer的实验:
 

控制项

 

使用MHC Dextramer试剂的实验中应包括阳性和阴性对照。

阳性对照的例子:

  • 阳性供体的抗原特异性T细胞克隆或T细胞系​​或PBMC的染色

阴性对照的例子:

  • 对MHC Dextramer阴性的T细胞克隆或T细胞系或来自阴性供体的PBMC染色
  • 携带MHC等位基因的MHC Dextramer与样品不匹配
  • 携带MHC Dextramer的肽与实验装置无关,预计不会产生阳性反应。
 

加快染色程序

可以将MHC Dextramer和抗CD8抗体混合并同时添加至淋巴样细胞,然后在4°C孵育20分钟,然后进行洗涤步骤(常规染色方案中的步骤5-7 )。但是,并非所有的抗CD8抗体克隆都适用于该染色程序。根据我们的经验,抗CD8抗体克隆SK1(BD)和KT15或YTS169.4(Dako)可以用于此特定过程,而克隆53-6.7(BD)不能。

应该注意的是, 与常规染色方法相比,在染色前混合MHC Dextramer和抗CD8抗体可产生较小的信噪比。
 

抗CD8 / CD3抗体

一些抗CD8和抗CD3抗体会干扰Dextramer的结合。

我们建议在使用前滴定抗CD8和/或抗CD3抗体,以评估该抗体是否干扰Dextramer结合。

右旋体试剂兼容:

  • 抗人CD8抗体克隆SK1(来自BD)
  • 抗鼠CD8抗体克隆KT15 / YTS169.4(来自Dako)
  • 抗人CD3抗体克隆SK7(BD,eBiosciences)/ S4.1(Invitrogen)/ UCHT1(Dako) 
 

TEL:021-50724187    QQ:4006551678